MATUZALEM® – flavonoid-kivonat
A SZLOVÁK ORVOSTUDOMÁNYI EGYETEMEN VÉGZETT GYAKORLATI MÉRÉSEK
Kísérletileg sikerült meghatározni a MATUZALEM fitokomplex, mint flavonoid komplex antioxidáns tulajdonságát, ami a következőképpen foglalható össze (néhány alapvető szakkifejezés kiegészítő magyarázatával együtt).
Teljes antioxidáns képesség meghatározása
(Total antioxidant status)
A „Total antioxidant status“ meghatározására alkalmazható pl. a Randox cég (Anglia) TAS vegyület-sorozata. A módszer az Abts+ (2,2´ -azino-di-(3-ethyl-benzthiazoline sulphonate)) gyök képződésén alapul. Ez a gyök a hidrogén-peroxidnak a met-myoglobinra való hatásával jön létre, amelynek során ferryl-myoglobín keletkezik, és ez reakcióba lép az Abts-sel az Abts+ gyök képződése közben.
Az anyag antioxidáns hatásának mérése a Trolox (E vitamin vízben oldódó formája) koncentrációjához viszonyítva történik, mivel a Trolox szolgál standardként az antioxidáns hatás kiszámításához.
Az eredmények az 1. sz. táblázatban találhatók.
A Matuzalem két féle – 0,1 és 0,01 mmol/l – töménységű oldatából lett kiszámítva az antioxidáns hatás, 10,54 ± 1,02 mmol/l Trolox hatásához viszonyítva.
1. sz. táblázat
| Matuzalem minta [c] |
Trolox-like [c] |
Trolox-like [c] / LX [c] |
| 0,1 | 0,663 | 6,63 |
| 0,01 | 0,113 | 11,29 |
| 0,1 | 1,215 | 12,15 |
| 0,1 | 1,216 | 12,16 |
| 0,1 | 1,047 | 10,47 |
A koncentrációtól függő hatást a 2. sz. táblázat tartalmazza.
A biológiai aktivitás megőrzése az oldatban TAS mérésével került meghatározásra a 0. 7. és 14. napon. Az eredményeket a 2. sz. táblázat tartalmazza.
2. sz. táblázat
| Koncentráció (mmol/l) ————————— Meghatározás napja |
0,01 | 0,1 | 1,0 |
| 0 | 0,531 | 1,125 | 2,374 |
| 7 | 1,217 | ||
| 14 | 1,025 |
A vízben oldódó antioxidáns hatás meghatározása (ACW)
ACW (Antioxidant capicity in water soluble antioxidants). meghatározására alkalmazhatók pl. a FAT vegyületsorozat (Berlin) oldatai.
– standardként Troloxot használható – E vitamin vízben oldódó formája
– Az ACW értékének meghatározására a MATUZALEM következő töménységű oldatait használtuk:
A = 1 mmol/l (5mg/ml)
B = 0,1 mmol/l (A oldat 10-szeres hígításban)
C = 0,01 mmol/l (B oldat 10-szeres hígításban)
Az ACW mérésénél az antioxidáns hatás úgy értékelhető, mint a görbe „lag“ fázisához viszonyított elmozdulás, ahol „lag“ a görbék elmozdulását jelenti a Trolox, mint standard esetében, és ahol az említett görbékből lett megszerkesztve a kalibrációs görbe; 1. sz. ábra.
1. sz. ábra
Ebből a kalibrációs görbéből történt az ACW koncentrációjának a kiszámítása, és az ACW aktivitás átszámítása alapján a MATUZALEM töménységi egységére (0,0087:0,01), az ACW-vel jellemzett hatás:
MATUZALEM aktivitása = E vitamin aktivitásának 0,87-ed része, amennyiben figyelembe vesszük a „lag“ fázis elmozdulását, azaz a „traping“ aktivitást.
Amennyiben viszont a kiértékelésnél figyelembe vesszük a kemilumineszcens görbe integrál területét, ami jobban megfelel „scavenger“ aktivitásnak, az a MATUZALEM egység-koncentrációjára átszámítva a Trolox scavenger aktivitásának 5,56-od részét jelenti.
Hasonló aktivitás SOD értékének és IC50 meghatásrozása MATUZALEM esetében
A hasonló aktivitás SOD értékének meghatározására kemiluminometrikus módszert alkalmaztuk, PHOTOCHEM kemiluminométerrel, ahol a meghatározásra a FAT (Berlin) vegyület-sorozat SOD aktivitáshoz szolgál. A mérések időtartama 3 perc volt, miközben feljegyeztük a kemilumineszcens görbe integrálterületét, és számítógép segítségével átszámoltuk az értékeket a SOD tömegegység-aktivitásra; 3. sz. táblázat.
3. sz. táblázat
| Minta sz. | -log IC50 | SOD aktivitás %-a |
| 1. | 6,171422 | 76,53 |
| 2. | 5,482290 | 67,98 |
| 3. | 5,768617 | 71,53 |
| 4. | 5,445406 | 67,53 |
| 5. | 5,67558 | 70,38 |
| 6. | 6,037841 | 74,87 |
| SOD | 8,064184 | 100,00 |
MATUZALEM hatása a DNS degenerálódása ellen
A MATUZALEM-nek a DNS degenerálódás ellen gyakorolt hatásának meghatározására kromoszomális DNS-t és xantin-xantin oxidáz rendszert használtunk szuperoxid képzésére
Reakciós keverék (1 ml) tartalmazott 0,25 mg DNS-t, és xantint 3,10-4 mol/l reakciós keverékenként. A reakciós keverékbe xantin-oxidáz lett adagolva olyan módon, hogy a percenkénti delta abszorbanció (510 nm) – amely a szuperoxid képződésének mutatója – értéke 0,03 és 0,04 között mozogjon.
A reakciós keverékhez meghatározott mennyiségű Matuzalem-oldat adagolása történt, illetve a kontroll oldat esetében nem lett Matuzalem hozzá adagolva. A reakciós keveréket 25 nM töménységű, 7,4 pH-értékű foszfát-pufferoldattal töltöttük fel aszükséges térfogatra. Ezt követően a reakciós keveréket 60 percen keresztül 37°C-os hőmérsékleten inkubáltuk. A kémiai reakciót 0,75 ml 2,8 %-os TCA-oldattal állítottuk be. Ezt követte 0,25 ml tio-barbiturátsav (TBA) hozzáadása, és a reakciós keveréknek zárt kémcsőben, 95°C-on 30 percig tartó főzése. A kihűtését követően spektrofotometriás mérés következett, és tetra-etoxipropán (TEP) standard anyag segítségével számoltuk ki a DNS-malondialdehyd (MDA) oxidációs karosodási folyamata során keletkezett végterméket, 1 mg DNS-re átszámítva. Az eredményeket a 4. sz. táblázat tartalmazza.
4. sz. táblázat
| DNS + X + XO | DNS + X + XO + | DNS + X –XO+ | DNS + X – XO+ | |
| Matuzalem Mmol/l |
0,0 | 0,1 | 0,01 | 0,001 |
| MDA mmol/mg DNS |
4,87 +-0,41 | 1,14 +- 0,12 | 2,07 +- 0,18 | 2,99 +- 0,32 |
| N | 9 | 6 | 9 | 6 |
| DNS degenerálódás | 100% | 23,4% | 42,5% | 61% |
| Töredezés inhibíciója | 0 % | 76,6% | 57,5% | 39 % |
Az elért eredmények alapján levonható következtetések:
a) MATUZALEM képes ellensúlyozni a szabad gyökök káros hatását.
b) MATUZALEM-nél átlagosan kimutatható a vízben oldódó E vitamin (Trolox) aktivitásának 10,54-szerese, a TAS (Randox, Anglia) vegyület-sorozatból származó organikus gyök – ABTS – alkalmazása esetében.
c) MATUZALEM-nél nagyobb mértékben a scavenger, mint a traping aktivitás mutatható ki.
d) MATUZALEM-nél a Trolox scavenger aktivitásának legalább 5,50-szerese mutatható ki.
e) MATUZALEM-nél a traping aktivitás a Trolox értékének csak 0,87-szerese.
f) MATUZALEM-nél kimutatható a szuperoxid-diszmutáz aktivitásának 0,67-szerese.
g) MATUZALEM képes meggátolni (inhibíció) a szuperoxid által indukált DNS-hasadást. 0,01 mmol/l töménységben körülbelül 57 %-ban gátolja a DNS degenerálódását.